分光光度計的類型很多，最常用的是可見分光光度計和紫外－可見光分光光度計。各種類型的分光光度計的結構和原理基本相同，一般包括光源、單色器、比色杯、檢測器和顯示器五大部分。
一、光源
光源指一種可以發射出供溶液或吸收物質選擇性吸收的光。光源應在一定光譜區域內發射出連續光譜，并有足夠的強度和良好的穩定性，在整個光譜區域內光的強度不應隨波長有明顯的變化。實際上許多光源的強度都隨波長變化而變化。為了解決這一問題，在分光光度計內裝有光強度補償裝置，使不同波長下的光強度達到一致。
可見光分光光度計常用光源是鎢燈，能發射出350nm～2500nm波長范圍的連續光譜，適用范圍是360nm～1000nm.現在常用光源是鹵鎢燈，其特點是發光效率大大提高，燈的使用壽命也大大延長。
紫外光光度計常用氫燈作為光源，其發射波長的范圍為150nm～400nm.因為玻璃吸收紫外光而石英不吸收紫外光，因而氫燈燈殼用石英制成。為了使光源穩定，分光光度計均配有穩壓裝置。
二、單色器
將來自光源的復合光分散為單色光的裝置稱為分光系統或單色器。單色器可分成濾光片、棱鏡和光柵。濾光片能讓某一波長的光透過，而其它波長的光被吸收，濾光片可分成吸收濾光片、截止濾光片、復合濾光片和干涉濾光片。棱鏡是用玻璃或石英材料制成的一種分光裝置，其原理是利用光從一種介質進入另一種介質時，光的波長不同在棱鏡內的傳播速度不同，其折射率不同而將不同波長的光分開，玻璃棱鏡色散能力大，分光性能好，能吸收紫外線而用于可見光分光光度計，石英棱鏡可用于可見光和紫外光分光光度計。光柵是分光光度計常用的一種分光裝置，其特點是波長范圍寬，可用于紫外、可見和近紅外光區，而且分光能力強，光譜中各譜線的寬度均勻一致。
三、比色杯
比色杯又稱為吸收池或比色皿。比色杯常用無色透明、耐腐蝕和耐酸堿的玻璃或石英材料做成，用于盛放待比色溶液的一種裝置。玻璃比色杯用于可見光區，而石英比色杯用于紫外光區，比色杯的光徑0.1～10cm，一般為1cm.同一臺分光光度計上的比色杯，其透光度應一致，在同一波長和相同溶液下，比色杯間的透光度誤差應小于0.5%.使用時應對比色杯進行校準。
四、檢測器
檢測器是將透過溶液的光信號轉換為電信號，并將電信號放大的裝置。常用的檢測器為光電管和光電倍增管。
五、顯示器
顯示器是將光電管或光電倍增管放大的電流通過儀表顯示出來的裝置。常用的顯示器有檢流計、微安表、記錄器和數字顯示器。檢流計和微安表可顯示透光度（T%）和吸光度（A）。數字顯示器可顯示T%、A和C（濃度）。
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