貨號(hào)：59824 快速亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒 (50)

英文名稱：EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit (50)
中文名稱：快速亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化試劑盒 (50)
品     牌：Qiagen
貨     號(hào)：59824

對(duì)來(lái)自基因組DNA、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本、細(xì)胞或組織樣本的DNA進(jìn)行超快速、高效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化

 優(yōu)化的操作流程對(duì)胞嘧啶轉(zhuǎn)化率超過(guò)99%

 新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內(nèi)完成有效地亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化

 可用于基因組DNA、全血、培養(yǎng)細(xì)胞、組織樣本和福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片

 快速、簡(jiǎn)潔的操作流程，有效轉(zhuǎn)化和純化DNA

 獨(dú)特的DNA Protect技術(shù)可防止DNA降解

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits可在少至30分鐘內(nèi)將未甲基化的胞嘧啶高效轉(zhuǎn)化成尿嘧啶，起始材料選擇也有出色的靈活性。簡(jiǎn)化的樣本裂解操作流程和直接的DNA亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化使轉(zhuǎn)化過(guò)程快速、省力，樣本包括全血、培養(yǎng)細(xì)胞、組織樣本、基因組DNA和福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片。創(chuàng)新的DNA Protect技術(shù)確保有效的DNA變性而不會(huì)降解，得到高產(chǎn)量DNA和可重復(fù)性結(jié)果。此外，轉(zhuǎn)化DNA可在少至10 μl洗脫緩沖液中洗脫，得到高濃度DNA。
 

性能

高效亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化 

在甲基化分析中，對(duì)DNA亞硫酸氫鹽處理，將未甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)化成胞嘧啶是最關(guān)鍵的步驟，因?yàn)榉磻?yīng)效率會(huì)對(duì)下游分析的可靠性造成很大影響。EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits含有的創(chuàng)新型Bisulfite Solution可進(jìn)行超快速、高效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，甚至可處理難分析的樣本，如來(lái)自女性樣本的X染色體基因組DNA，因?yàn)?/span>2個(gè)X染色體中有一個(gè)是高度甲基化的（參見(jiàn)Highly efficient cytosine conversion of X chromosome DNA）。焦磷酸測(cè)序?qū)Π奏まD(zhuǎn)化定量分析表明，與其他供應(yīng)商的試劑盒相比，EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit的轉(zhuǎn)化效果明顯更好，特別是當(dāng)起始材料的量很有限時(shí)（參見(jiàn)Superior bisulfite conversion）。

DNA片段化減少

完全亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化所需的劇烈條件通常會(huì)造成高度DNA片段化和樣本損失，導(dǎo)致DNA產(chǎn)量低、高度片段化DNA以及不可重復(fù)的轉(zhuǎn)化率。QIAGEN獨(dú)特的DNA Protect Buffer可防止DNA降解，與其他供應(yīng)商的試劑盒轉(zhuǎn)化的DNA相比，可獲得更大片段大小的完全轉(zhuǎn)化DNA（參見(jiàn)Analysis of DNA fragment sizes after bisulfite conversion）。

原理

DNA樣本的快速、完全的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化對(duì)于準(zhǔn)確的DNA甲基化分析是必需的。EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits含有的創(chuàng)新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內(nèi)完成高效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。簡(jiǎn)化的樣本裂解和轉(zhuǎn)化操作流程可對(duì)DNA進(jìn)行有效純化和亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，而獨(dú)特的DNA Protect技術(shù)可最大程度減少亞硫酸氫鹽處理時(shí)的DNA片段化。3種EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits相互聯(lián)系，形成的完整系統(tǒng)可對(duì)一系列起始材料的DNA進(jìn)行直接亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化（參見(jiàn)Interconnected protocols of the EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits）。但每種試劑盒特有其獨(dú)特之處，重點(diǎn)處理特定樣本類型，各自含有需要的所有緩沖液和試劑。每個(gè)試劑盒的組分可有效裂解樣本，減少DNA損失，進(jìn)行完全亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，并在轉(zhuǎn)化及DNA回收過(guò)程中形成有效保護(hù)。

快速亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits提供非常快速、簡(jiǎn)潔的操作流程，可有效轉(zhuǎn)化并純化來(lái)自基因組DNA、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片、血液、細(xì)胞或組織樣本中的DNA。試劑盒含有高濃度的Bisulfite Solution，將未甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶所需的時(shí)間從幾個(gè)小時(shí)減少到了30分鐘，含有的制備緩沖液無(wú)需在亞硫酸氫鹽處理前分離DNA。而且，亞硫酸氫鹽熱循環(huán)程序提供優(yōu)化的孵育步驟，可使DNA熱變性、磺基化以及胞嘧啶脫氨，使胞嘧啶轉(zhuǎn)化率超過(guò)99%。胞嘧啶轉(zhuǎn)化的最后一個(gè)步驟是脫磺基化，此過(guò)程可在純化流程時(shí)簡(jiǎn)單柱上完成。

DNA Protect Buffer

樣本DNA的快速、完全的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化對(duì)于正確確定甲基化模式是最關(guān)鍵的。這個(gè)過(guò)程需要將DNA在高濃度亞硫酸氫鹽、高溫、低pH條件下孵育。這些劇烈的條件經(jīng)常造成高度DNA片段化和純化時(shí)的DNA損失。普通亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化需要大量的起始DNA，以彌補(bǔ)轉(zhuǎn)化時(shí)的DNA降解和純化時(shí)的DNA損失，這常常導(dǎo)致DNA產(chǎn)量低、片段化高和不可重復(fù)的轉(zhuǎn)化率。使用EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits時(shí)，獨(dú)特的DNA Protect Buffer可在亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化時(shí)防止由于高溫、低pH值造成的DNA片段化。此緩沖液還可使DNA有效變性，得到完全胞嘧啶轉(zhuǎn)化所需的單鏈DNA。DNA Protect Buffer含有方便的pH指示劑，可確保胞嘧啶轉(zhuǎn)化時(shí)具有正確的pH（參見(jiàn)DNA Protect Buffer）。

福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本的脫蠟

從福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本中抽提DNA的第一步是脫蠟，石蠟先是被熔解再被去除，暴露出的樣本進(jìn)行后續(xù)的裂解液和蛋白酶K處理。EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit中含有的新型化學(xué)試劑Deparaffinization Solution可優(yōu)化福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片的去石蠟、裂解和解交聯(lián)過(guò)程。Deparaffinization Solution可獲得高DNA回收率，因?yàn)槿芤涸跇颖旧蠒r(shí)就可進(jìn)行蛋白酶K消化。由于無(wú)需沉淀福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本或去除含有石蠟的上清，可避免脫蠟時(shí)的樣本損失風(fēng)險(xiǎn)。

操作流程

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit操作流程包括幾個(gè)簡(jiǎn)單的步驟：從樣本中制備DNA，未甲基化胞嘧啶的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)化的單鏈DNA結(jié)合到MinElute DNA離心柱膜上；洗滌；膜上結(jié)合DNA的去磺基化；漂洗膜上結(jié)合DNA，去除去磺基化試劑；從離心柱上洗脫純化的轉(zhuǎn)化DNA。福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片、全血、細(xì)胞培養(yǎng)基或組織樣本的制備是不同的，但是提取DNA的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化流程對(duì)所有樣本類型都是相同的（參見(jiàn)Interconnected protocols of the EpiTect Fast DNA Conversion Kits）。所有實(shí)驗(yàn)方案可獲得相同的胞嘧啶轉(zhuǎn)化率，轉(zhuǎn)化DNA的純化也能獲得同等DNA回收，與DNA起始量無(wú)關(guān)。

試劑盒描述

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit包括精心配制的緩沖液和試劑，可對(duì)基因組DNA進(jìn)行簡(jiǎn)潔、有效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和對(duì)轉(zhuǎn)化DNA的回收（參見(jiàn)EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit procedure）。新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內(nèi)進(jìn)行完全亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，運(yùn)用DNA Protect技術(shù)和QIAGEN離心柱可獲得很少降解的完全轉(zhuǎn)化DNA，在10 μl洗脫液中洗脫，用于需要高濃度的下游應(yīng)用。EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit在20 μl體系中可轉(zhuǎn)化1 ng–2 μg DNA，在最大40 μl體系中可轉(zhuǎn)化1–500 ng DNA。

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit

EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit可處理福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織，EpiTect Fast FFPE Lysis Kit含有的專門(mén)緩沖液可有效去石蠟并裂解福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片（參見(jiàn)EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit procedure），EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit可對(duì)提取的DNA進(jìn)行快速、有效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)方案包括的優(yōu)化步驟便于DNA結(jié)合，可用于單個(gè)福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片（厚度為10 μm）。從福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織中提取DNA很難避免DNA片段化，后續(xù)亞硫酸氫鹽處理時(shí)的劇烈條件更會(huì)加重片段化。QIAGEN提供可靠地DNA Protect技術(shù)可最大程度減少轉(zhuǎn)化反應(yīng)造成的片段化，獲得更高產(chǎn)量的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化DNA。

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit

EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit可處理全血、培養(yǎng)細(xì)胞或組織樣本，EpiTect Fast LyseAll Lysis Kit（參見(jiàn)EpiTect Fast 96 LyseAll Bisulfite Kit procedure）含有新型裂解緩沖液，EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit可對(duì)提取DNA進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。實(shí)驗(yàn)方案包括的優(yōu)化步驟便于DNA結(jié)合，獨(dú)特配制的裂解緩沖液使DNA從樣本中釋放更為簡(jiǎn)潔。此試劑盒可用于0.5–20 μl血液或10–10⁵個(gè)細(xì)胞（少至60 pg DNA）。

應(yīng)用

EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits可對(duì)各種起始材料的DNA進(jìn)行快速、有效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，非常適合DNA甲基化分析的技術(shù)，包括：

 PCR：終點(diǎn)、Real-Time和甲基化特異性PCR

 亞硫酸氫鹽測(cè)序（直接和克隆）

 COBRA (Combined Bisulfite Restriction Analysis)

 焦磷酸測(cè)序